冷冻干燥保藏法/冻干品的保存

　　(1)准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造,形状可用长颈球形底的,亦称泪滴型安瓿管(图Ⅶ-15),大小要求外径6—7．5mm,长105mm,球部直径9—11mm,壁厚0．6—1．2mm.也可用没有球部的管状安瓿管.塞好棉塞,1．05kg/cm2>,121．3℃灭菌30分钟,备用.

　　(2)准备菌种,用冷冻干燥法保藏的菌种,其保藏期可达数年至十数年,为了在许多年后不出差错,故所用菌种要特别注意其纯度,即不能有杂菌污染,然后在最适培养基中用最适温度培养,使培养出良好的培养物.细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期,若用对数生长期的菌种进行保藏,其存活率反而降低.一般,细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7—10天.

　　(3)制备菌悬液与分装以细菌斜面为例,用脱脂牛乳2ml左右加入斜面试管中,制成浓菌液,每支安瓿管分装0．2ml.

　　(4)冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售,价值昂贵,此处介绍的是简易方法与装置,可达到同样的目的.

　　将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻,无低温冰箱可用冷冻剂如干冰(固体CO2>)酒精液或干冰丙酮液,温度可达-70℃.将安瓿管插入冷冻剂,只需冷冻4—5分钟,即可使悬液结冰.

　　(5)真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态,需准备冷冻槽,槽内放碎冰块与食盐,混合均匀,可冷至-15℃.装置仪器如图Ⅶ-16,安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内.

　　抽气一般若在30分钟内能达到93．3Pa(0．7mmHg)真空度时,则干燥物不致熔化,以后再继续抽气,几小时内,肉眼可观察到被干燥物已趋干燥,一般抽到真空度26．7Pa(0．2mmHg),保持压力6—8小时即可.

　　(6)封口抽真空干燥后,取出安瓿管,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管(图Ⅶ-17)继续抽气,约10分钟即可达到26．7Pa(0．2mmHg).于真空状态下,以煤气喷灯的细火焰在安瓿管颈中央进行封口.封口以后,保存于冰箱或室温暗处.